Ana иммуноблот

Диагностика системной красной волчанки

Комплексное исследование аутоантител, относящихся к иммунологическим критериям системной красной волчанки (АНА, анти-dsDNAи антител к кардиолипину), которое используется для диагностики этого заболевания.

Синонимы русские

Серологическая диагностика СКВ;

аутоантитела при СКВ.

Синонимы английские

Serologic Tests, SLE;

Autoantibodies, SLE;

Immunological Criteria, SLE.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

  • Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Системная красная волчанка (СКВ) – аутоиммунное заболевание, характеризующееся разнообразными клиническими проявлениями и широким спектром аутоантител. Наибольшее клиническое значение имеют следующие виды антител:

  • Антинуклеарный фактор (АНФ, другое название: антинуклеарные антитела, АНА) – это гетерогенная группа аутоантител, направленных против компонентов собственных ядер. АНА обнаруживаются у 98 % пациентов с СКВ. Такая высокая чувствительность означает, что отрицательный результат исследования исключает диагноз «СКВ». Эти антитела, однако, не специфичны для СКВ: они также выявляются в крови пациентов с другими заболеваниями (другие заболевания соединительной ткани, аутоиммунный панкреатит, первичный билиарный цирроз, некоторые злокачественные новообразования). Существует несколько способов определения АНА в крови. Метод непрямой реакции флюоресценции (РНИФ) с использованием человеческих эпителиальных клеток HEp-2 позволяет определить титр и тип свечения. Наиболее характерны для СКВ гомогенный, периферический (краевой) и крапчатый (гранулярный) типы свечения.
  • Анитела к двухцепочечной ДНК (анти-dsDNA) – аутоантитела, направленные против собственной двуспиральной ДНК. Они являются разновидностью АНА. Анти-dsDNA обнаруживаются приблизительно у 70 % пациентов с СКВ. Хотя чувствительность анти-dsDNAв отношении СКВ ниже, чем у АНА, их специфичность достигает 100 %. Такая высокая чувствительность означает, что положительный результат теста подтверждает диагноз «СКВ».
  • Антифосфолипидные антитела – это гетерогенная группа аутоантител, направленных против фосфолипидов и связанных с ними молекул. В эту группу входят антитела к кардиолипину, бета-2-гликопротеину, аннексину V, фосфатидил-протромбину и другие. 5-70 % пациентов с СКВ имеют антифосфолипидные антитела. Наиболее часто выявляемым видом антифосфолипидных антител являются антикардиолипиновые антитела (АКА). АКА направлены против одного из фосфолипидов мембраны митохондрий, называемого кардиолипином (известно, что АКА направлены не на сам фосфолипид, а на плазменный аполипопротеин, ассоциированный с кардиолипином).

Диагностика СКВ достаточно трудна и носит комплексный характер. Иммунологические нарушения – это характерная черта этого заболевания, и лабораторные исследования являются частью диагностического алгоритма. Во избежание ошибок врачу (и пациенту) необходимо понимать, какова роль лабораторных анализов в диагностике этого заболевания и как правильно интерпретировать их результаты.

Ранее к диагностическим критериям СКВ относили LE-клетки и стойкие ложноположительные серологические тесты на сифилис. С развитием методов лабораторной диагностики и более полным пониманием патогенеза СКВ диагностические критерии менялись. В настоящее время для диагностики СКВ наиболее часто ориентируются на классификационные критерии Американского колледжа ревматологии (ACR) 1997 г. Они включают в себя клинические признаки, показатели крови и иммунологические нарушения (всего 11 критериев). При выявлении у пациента 4 и более критериев ACR диагноз «СКВ» считается вероятным. К иммунологическим критериям ACRотносятся:

  • Наличие антител к двуспиральной ДНК (анти-dsDNA), антител к антигену Smith (анти-Sm) или антифосфолипидных антител (включая антикардиолипиновые антитела IgG и IgM, волчаночный антикоагулянт и ложноположительные реакции на сифилис) – 1 балл. Видно, что в классификации ACR все три вида аутоантител объединены в один критерий.
  • Наличие антинуклеарных антител АНА – 1 балл. Более высокий титр (более 1:160) более специфичен для СКВ.

В 2012 г. эти критерии были пересмотрены с учетом новых представлений о СКВ, результатом чего стали классификационные критерии СКВ SLICC. Интерпретация иммунологических нарушений при СКВ подверглась значительным изменениям.К иммунологическим критериям SLICCотносятся:

  • Наличие АНА в титре, превышающем референсное значение лаборатории – 1 балл;
  • Наличие анти-dsDNA в титре, превышающем референсное значение лаборатории, или при использовании ИФА (ELISA) – в два раза превышающем лабораторное значение – 1 балл;
  • Наличие анти-Sm – 1 балл;
  • Наличие антифосфолипидных антител, включая антикардиолипиновые антитела IgG, IgM и IgA в высоком и среднем титре, волчаночный антикоагулянт, ложноположительный результат антикардиолипинового теста/микрореакции преципитации на сифилис, антител к бета-2-гликопротеину IgG, IgM и IgA) – 1 балл;
  • Снижение уровня комплемента (C3,C4 или C50) – 1 балл;
  • Положительный результат прямого теста Кумбса (при отсутствии гемолитической анемии) – 1 балл.

При выявлении у пациента 4 и более критериев SLICC (при этом обязательно наличие одного клинического и одного иммунологического критерия) диагноз «СКВ» считается вероятным. Видно, что критерий АНА остался неизменным, в то время как анти-dsDNA, анти-Smи антифосфолипидные антитела были разделены на самостоятельные критерии. Кроме того:

(1) рекомендован более строгий подход к интерпретации результата анализа на анти-dsDNA при использовании метода ИФА (титр должен быть в два раза больше референсного значения);

(2) антикардиолипиновые антитела в низком титре более не принимаются во внимание;

(3) добавлен класс IgA антикардиолипиновых антител и антител к бета-2-гликопротеину;

(4) добавлены дополнительные критерии (снижение уровня комплемента, антител к бета-2-гликопротеину и пр.).

В данное комплексное исследование вошли наиболее частовстречающиеся аутоантитела при СКВ (АНА, анти-dsDNA и антикардиолипиновые антитела). Хотя эти три вида антител по-прежнему остаются важными критериями, появляются новые критерии, которые могут быть полезны для диагностики СКВ. Поэтому в некоторых случаях этот комплексный анализ дополняют другими лабораторными тестами. Следует еще раз подчеркнуть, что, хотя лабораторные тесты играют огромную роль в диагностике СКВ, их следует оценивать только в комплексе с клиническими данными.

Для чего используется исследование?

  • Для диагностики системной красной волчанки.

Когда назначается исследование?

  • При наличии симптомов системной красной волчанки: лихорадки, поражения кожи (эритема-бабочка, дискоидные и другие высыпания на коже лица, предплечий, груди), артралгий/артрита, пневмонита, перикардита, эпилепсии, поражения почек;
  • при наличии типичных для СКВ изменений в клиническом анализе крови: гемолитической анемии, лейкопении или лимфопении, тромбоцитопении.

Что означают результаты?

Референсные значения

1. Антинуклеарный фактор

Титр:

Результат: отрицательный.

2. Антитела к двухцепочечной ДНК (анти-dsDNA), IgG: 0 — 25 МЕ/мл.

3. Антитела к кардиолипину, IgG: 0 — 10 Ед/мл.

Антитела к кардиолипину, IgM: 0 — 10 Ед/мл.

Иммунологические критерии СКВ (ACR, 1997):

  • анти-dsDNA, анти-Sm или антифосфолипидные антитела (включая антикардиолипиновые антитела IgG и IgM, волчаночный антикоагулянт и ложноположительные реакции на сифилис);
  • АНА.

Иммунологические критерии СКВ (SLICC, 2012):

  • АНА;
  • положительный результат анти-dsDNA, превышающий в два раза референсное лабораторное значение (при использовании метода ИФА);
  • антикардиолипиновые антитела IgG, IgM или IgA в высоком или среднем титре;
  • другие самостоятельные критерии: анти-Sm, снижение уровня C3,C4 или C50, положительный результат прямого теста Кумбса.

Что может влиять на результат?

  • Время, прошедшее с начала болезни;
  • активность болезни.



Важные замечания

  • Результат анализа следует оценивать вместе с данными дополнительных лабораторных и инструментальных исследований;
  • для получения точного результата необходимо следовать рекомендациям по подготовке к тесту.

Также рекомендуется

Антитела к бета-2-гликопротеину

С3 компонент комплемента

С4 компонент комплемента

Клинический анализ крови с лейкоцитарной формулой и СОЭ

Кто назначает исследование?

Врач общей практики, терапевт, ревматолог.

Литература

Анализ на антинуклеарные антитела

Что такое антинуклеарные антитела

Свечение антител в микроскопе

Антинуклеарные антитела — это патологические компоненты иммунной системы, ведущие к возникновению аутоиммунных заболеваний соединительной ткани, таких как системная красная волчанка, синдром и болезнь Шегрена, системная склеродермия.

Антинуклеарные антитела представляют из себя белки-иммуноглобулины, вырабатываемые защитными клетками человеческого тела (лимфоцитами). Из-за сбоя в работе иммунной системы ядра собственных клеток распознаются ею как чужеродные и вредные, что приводит к ошибочной выработке антител к разным компонентам клеточных ядер.

Всего выявлено более 190 компонентов ядра, к которым может вырабатываться патологический иммунный ответ, однако диагностическое значение имеют около 20 из них. К наиболее важным относят антитела к одно- и двуспиральной ДНК, гистонам, нуклеосомам и рибосомальному P-протеину.

Ядро содержится практически в любой клетке человеческого тела, за исключением некоторых кровяных. Оно находится внутри клетки и защищено собственной оболочкой, цитозолем и внешней клеточной мембраной. Антитела находятся во внеклеточной среде и чаще всего не могут напрямую контактировать с ядром, повреждая его. Однако при любом нарушении целостности клеточных оболочек антинуклеарные антитела, если они имеются в организме, способны связываться с компонентами ядра, образуя нерастворимые комплексы. Именно они и являются причиной возникновения разнообразных аутоиммунных заболеваний соединительной ткани.

Механизм образования

Антинуклеарные антитела и рецепторы

В норме собственные клетки организма даже в разрушенном состоянии иммунного ответа не вызывают. Однако сбои в работе иммунной системы наблюдаются постоянно даже у здоровых лиц, и при неблагоприятном стечении обстоятельств иммунитет может сформироваться на любой из компонентов клетки. В организме предусмотрена своеобразная система «отбраковки» патологических антител, в большинстве случаев она срабатывает, антитела уничтожаются, не вызывая болезнь.

Однако в некоторых случаях антинуклеарные антитела возникают в больших количествах и оказываются вовремя не распознаны организмом как патологические. Чаще всего это бывает при обширных солнечных ожогах, когда миллионы клеток кожи оказываются повреждены ультрафиолетом. Ядра погибших клеток оказываются непосредственно во внутренней межклеточной среде организма, где их встречают иммунные клетки — лимфоциты и макрофаги.

ДНК из ядер, гистоновые белки и другие белковые и нуклеиновые компоненты могут быть настолько повреждены ультрафиолетовым излучением, что в некоторых случаях изменяются до неузнаваемости. Именно это и провоцирует иммунные клетки вырабатывать против них антитела, как против чужеродных веществ.

Нормальные значения АНА

Отсутствие антител — вариант нормы

Нормальным значением является полное отсутствие антинуклеарных антител. При скрининговом ИФА-исследовании отрицательный ответ чаще всего записывается с указанием титра (разведения), пример: «Отрицательно, < 1:160». При развернутом иммуноблот-исследовании на антитела к разным компонентам ядра клетки, ответ зачастую записывается для каждого вида антител по отдельности. Например: «АТ к двуспиральной ДНК — отрицательно; АТ к PCNA — отрицательно; АТ к Scl-70 – отрицательно».

Иногда у здоровых лиц обнаруживаются AHA в небольших количествах (слабоположительный результат), что может свидетельствовать о генетической предрасположенности к аутоиммунным заболеваниям. Результат анализа «Сомнительно» может быть вызван наличием антител в очень низкой концентрации, которая находится около пороговых значений чувствительности медицинской тест-системы для анализа. Чаще всего после получения результата «Сомнительно» анализ рекомендуется повторить через 4-5 недель.

Причины повышения ANA

Повышение антител при системной склеродермии

Положительный результат анализа может свидетельствовать о наличии одного или нескольких следующих заболеваний:

  • системная красная волчанка,
  • лекарственная волчанка,
  • синдром или болезнь Шегрена,
  • системная склеродермия,
  • синдром Шарпа.

Гепатит может стать причиной слабоположительного результата

Слабоположительный результат может быть вызван как наличием вышеперечисленных заболеваний, так и заболеваниями, не связанными с системой иммунитета. Перечислим основные болезни, которые могут его вызвать:

  • ревматоидный артрит, в том числе ювенильный (детский),
  • первичная легочная гипертензия,
  • идиопатический легочной фиброз,
  • синдром Рейно (дигитальный васкулит),
  • болезнь Крона,
  • узелковый периартериит,
  • гепатиты различной природы,
  • злокачественные новообразования (опухоли),
  • некоторые инфекционные болезни (туберкулез, шистосомоз, малярия).

Слабоположительный результат анализа иногда выявляется у здоровых лиц, чаще у женщин в возрасте старше 60 лет.

Показания к исследованию

Показанием для проведения анализа могут быть боли в суставах

Исследование показано при симптомах, не исключающих аутоиммунную патологию соединительной ткани:

  • длительно сохраняющаяся повышенная температура тела;
  • беспричинное снижение массы тела;
  • уменьшение регионарных лимфатических узлов;
  • болезненность и скованность в суставах, когда не установлена иная причина патологии;
  • боли в мышцах;
  • кожная сыпь, особенно на лице в виде «красной бабочки» (нос и щеки рядом с крыльями носа);
  • перикардит и плеврит неясной причины;
  • изменения в общем и биохимическом анализе крови, когда исключены другие виды патологии.

Также анализ назначается при имеющемся аутоиммунном заболевании для контроля за эффективностью лекарственной терапии.

Подготовка к анализу и методика проведения исследования

Определение антител может быть выполнено в нескольких вариантах

Анализ сдается утром натощак либо в другое время, однако не ранее 5-6 часов после последнего приема пищи. Также желательно не принимать никакие лекарственные средства до взятия крови на исследование.

Существует несколько вариантов проведения анализа, отличающихся по своей точности и возможности количественной оценки концентрации антител.

Скрининговое ИФА-исследование (иммуноферментный анализ) позволяет выявить наличие суммарных антинуклеарных антител и их титра. К плюсам метода относится его относительная дешевизна и возможность выяснить, необходимы ли расширенные исследования. При отрицательном результате анализа дальнейшие исследования чаще не показаны.

Непрямая флуоресцентная микроскопия — это метод, основанный на окрашивании антител специальными веществами, дающими под ультрафиолетовым светом зеленое свечение. Тип и характер свечения позволяет врачу лабораторной диагностики определить, с какими компонентами клетки связались антитела, а также примерно узнать их количество.

Иммуноблот-исследование позволяет определить наличие каждого типа антинуклеарных антител по отдельности. Чаще всего этот анализ назначается после положительного результата другого исследования для уточнения диагноза.

Факторы, влияющие на результат

Лекарственные препараты способны искажать результат

Ложноположительный результат анализа может быть вызван приемом некоторых групп лекарственных препаратов:

  • антидепрессанты;
  • антиаритмики (бисопролол, биосотал);
  • противосудорожные препараты (карбамазепин, фенитоин);
  • препараты для лечения атеросклероза (ловастатин, аторвастатин);
  • средства для понижения артериального давления.

Прием лекарственных средств желательно ограничить за 1-2 дня до анализа в строгом соответствии с рекомендациями лечащего врача.

Лечение отклонений от нормы

Диагноз и лечение определяет врач

Для лечения аутоиммунных заболеваний соединительной ткани применяются следующие группы препаратов:

  • кортикостероиды (позволяют уменьшить иммунный ответ организма и снизить концентрацию патологических антител);
  • антифиброзные препараты (уменьшаю явления склерозирования соединительной ткани);
  • иммуносупрессивные средства;
  • ангиопротекторы (препараты, защищающие сосуды);
  • нестероидные противовоспалительные средства.

Стоит заметить, что диагностика данной группы заболеваний сложна и требует ряда дополнительных исследований, кроме выявления антинуклеарных антител и их вида. Диагноз чаще всего не может быть установлен после однократного исследования крови.

52-20-300. Антиядерные (антинуклеарные) антитела (иммуноблот; комплексное исследование): Ат к ядерным антигенам: SS-A52, SS-A60, SS-B, RNP, Sm, центромера B, Jo-1, Scl-70, рибосомальный белок

Антинуклерные антитела (АНА) — группа аутоантител, которые связываются с ядрами собственных клеток организма и разрушают их. Они встречаются более чем у 90 % больных с диффузными болезнями соединительной ткани, а также часто отмечаются при аутоиммунных заболеваниях. На сегодняшний день известно около 200 разновидностей антинуклеарных антител. Однако в связи с редкой встречаемостью многих из них, не все разновидности используются для клинической диагностики.

Иммуноблот антинуклеарных антител позволяет в одном тесте одновременно провести исследование основных разновидностей антинуклеарных антител, что позволяет провести дифференциальную диагностику в пределах основных системных ревматических заболеваний. Каждая разновидность аутоантител, выявляемая с помощью иммуноблота, обычно отмечается у пациентов с характерной клинической картиной, поэтому спектр аутоантител позволяет не только диагностировать заболевание, а также выявить риск развития определенных характеристик заболевания.

Иммуноблот антинуклеарных антител обычно используют на втором этапе серологического обследования при положительном результате других тестов, указывающих на присутствие в сыворотке обследуемого антинуклеарных антител. К таким тестам относится выявление антинуклеарного фактора (АНФ), антинауклеарных антител и антител к экстрагируемому ядерному антигену (ЭНА). Метод характеризуется высокой специфичностью для диагностики ревматических системных заболеваний.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *