Анализ на анф

Содержание

Лабораторная диагностика аутоиммунных заболеваний

журнал «Terra Medica nova» № 3 (15) 2007

С. В. Лапин,кандидат медицинских наук
А. А. Тотолян, доктор медицинских наук
Научно-методический центр по молекулярной медицине;
Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И. П. Павлова

Залогом эффективного лечения многих аутоиммунных заболеваний и предотвращения инвалидизации больного является тщательное лабораторное обследование. Его основу составляет выявление аутоантител в сыворотке крови и биологических жидкостях. В обзоре представлены принципиальные подходы к использованию аутоантител в качестве диагностических маркеров, описаны основные семейства аутоантител и применение конкретных серологических тестов в диагностике широкого спектра аутоиммунных заболеваний.

Заболевания, в патогенезе которых лежит патологическая реакция иммунной системы против собственных антигенов организма, относят к аутоиммунным. Врачам практически всех специальностей приходится сталкиваться с аутоиммунными процессами. Аутоиммунные состояния преобладают в ревматологии, нефрологии, дерматологии, часто отмечаются в гастроэнтерологии, неврологии, пульмонологии и многих других терапевтических специальностях (табл. 1). Распространенные аутоиммунные заболевания, такие как ревматоидный артрит, инсулинзависимый сахарный диабет, системные заболевания соединительной ткани, ускоряют течение атеросклероза и приводят к сердечно-сосудистой патологии. В основе атеросклероза, как полагают многие исследователи, лежит аутоиммунная реакция в отношении компонентов соединительной ткани сосудистой стенки и компонентов плазмы крови.

Таблица 1. Частота основных аутоиммунных заболеваний в США (данные за 1996 г.)

Механизмы нарушения иммунологической толерантности при аутоиммунных заболеваниях изучены плохо. Очевидно, что важную роль играет генетическая предрасположенность, обусловленная набором генов системы HLA, которые определяют направление иммунного ответа. На фоне предрасположенности определенное сочетание факторов внешней среды, включающее тканевое воспаление, вирусные и бактериальные инфекции, разрушение ткани или нарушение функций гематотканевых барьеров, приводит к сенсибилизации по отношению к собственным антигенам.

Хотя клеточный иммунный ответ лежит в основе аутоиммунных заболеваний, однако до сих пор не существует надежных и стандартизованных методов определения клеточных реакций против собственных антигенов. В то же время гуморальные иммунные ответы, характеризующиеся появлением аутоантител, широко используются в диагностике аутоиммунных заболеваний.

Аутоантитела представляют собой иммуноглобулины классов IgG, IgA, IgM, специфически связывающиеся с антигенными эпитопами молекул человеческого организма, хотя в лабораторных методах иногда используются близкие или идентичные человеческим антигены лабораторных животных. Известно, что аутоантитела, реагирующие с человеческими антигенами, изредка могут отмечаться на фоне нормального функционирования иммунной системы. Характерно, что в норме или на фоне неиммунных заболеваний аутоантитела выявляются в низких титрах, т. е. обладают низкой аффинностью. Среди аутоантител, которые чаще других отмечаются в норме, выделяют антинуклеарные антитела, небольшое содержание которых может быть выявлено у 2–3% здоровых лиц, несколько чаще — у пожилых, а также ревматоидный фактор, встречаемость которого в пожилом возрасте может достигать 10% популяции. Сравнительно часто на фоне неиммунных заболеваний выявляются антикардиолипиновые антитела, антитела к тиреопероксидазе и тиреоглобулину. Причина появления аутоантител на фоне нормального функционирования иммунной системы неизвестна, однако, как полагают, аутоантитела в норме могут играть определенную роль в осуществлении аутотолерантности и предотвращении развития аутоиммунных процессов.

Роль аутоантител в патогенезе большинства аутоиммунных процессов четко не определена. При подавляющем большинстве аутоиммунных заболеваний аутоантитела не принимают участия в конкретных патогенетических механизмах и являются свидетелями аутоиммунного процесса. Действительно, практически при каждом аутоиммунном заболевании может быть определена группа так называемых серонегативных форм, при которых аутоантитела не обнаруживаются даже при классическом течении заболевания. Прежде всего, это связано с несовершенством применяемых лабораторных методов, и по мере описания новых разновидностей аутоантител группа «серонегативных» пациентов сужается. В то же время этот факт подчеркивает разнообразие мишеней аутоантител и широкую направленность иммунного ответа.

Антинуклеарный фактор и антинуклеарные антитела

Антинуклеарные антитела (АНА) представляют собой семейство аутоантител, насчитывающее около 200 разновидностей, которые способны связываться с нуклеиновыми кислотами и ассоциированными с ними белками. Они встречаются более чем у 90% пациентов с диффузными заболеваниями соединительной ткани, такими как системная красная волчанка, склеродермия, смешанное заболевание соединительной ткани, синдром Шегрена, аутоиммунные заболевания печени. Представители этого семейства аутоантител могут быть обнаружены при множестве инфекционных, воспалительных и онкологических заболеваний. Все это обусловливает большое клиническое значение серологического обследования больных с подозрением на системное аутоиммунное заболевание. Действительно, тесты по определению АНА являются наиболее часто выполняемыми лабораторными анализами во всех клинических иммунологических лабораториях.

Общепризнанный стандарт определения АНА — выявление антинуклеарного фактора (АНФ) на перевиваемой клеточной линии НЕр-2 с помощью непрямой иммунофлуоресценции. Совместно с НЕр-2 клетками может использоваться печень приматов, применение которой улучшает выявление некоторых разновидностей АНА. Этот подход широко используется в наборах для непрямой иммунофлуоресценции, предлагаемых немецкой фирмой «EUROIMMUN». Подобный подход позволяет лучше дифференцировать ряд антинуклеарных антигенов, включая SSA, RNP, Ku. Другим надежным субстратом является модифицированная линия клеток НЕр-2 — клетки Hep-20–10, обладающая высоким митотическим потенциалом и увеличивающая выявляемость антител к антигенам митотических клеток, таких как PCNA и центромеры. Некоторые фирмы («Immunoconcepts», США) предлагают также клетки Hep-2000, которые содержат дополнительный ген SSA антигена и обладают повышенной чувствительностью для его выявления.

Результат метода выражается в титре, который указывает на содержание и аффинность аутоантител. Норма составляет менее 1/80, причем низкие титры АНФ 1/80–1/160 изредка могут отмечаться у клинически здоровых лиц. Обнаружение высоких титров АНФ более 1/320 с большей вероятностью указывает на системное ревматическое заболевание. Кроме определения титра, АНФ на перевиваемой клеточной линии НEр-2 позволяет описать тип свечения ядра клетки, который указывает, с какими антигенными мишенями взаимодействуют аутоантитела. Определяются 6 основных типов свечения и около 20 минорных типов свечения, описание которых самостоятельного диагностического значения не имеет. Гомогенный и периферический типы свечения ядра наиболее характерны для системной красной волчанки; гранулярный отмечается при синдроме Шегрена, смешанном заболевании соединительной ткани и артритах; ядрышковый и центромерный типы свечения характерны для склеродермии и ее разновидностей. Цитоплазматический тип свечения клетки отмечается при аутоиммунных заболеваниях печени.

К сожалению, в связи с методическими ограничениями, в большинстве отечественных лабораторий популярность получили скрининговые иммуноферментные тесты для определения антинуклеарных антител (антител к экстрагируемым ядерным антигенам), основанные на методе ИФА. Их иногда приравнивают к определению АНФ, хотя мы считаем целесообразным называть термином «АНФ» только иммунофлуоресцентный тест выявления АНА. Иммуноферментные тесты определяют АНА, направленные только к растворимым антигенам ядра клетки. По нашему опыту, они могут упускать до трети положительных результатов выявления АНА, и в то же время эти методы являются сравнительно неспецифичными.

После обнаружения АНФ или антител к экстрагируемым ядерным антигенам необходимо установить клеточную мишень АНА, так как определение спектра АНА тесно связано с конкретным диагнозом. Минимальный набор обычно включает определение антител к Sm, RNP, SS-A и SS-B антигенам, а также Scl-70, CENT-B и Jo-1. Такой спектр обобщает наиболее часто встречающиеся мишени АНА, а также основные ревматические заболевания.

Одним из наилучших подходов к определению спектра АНА является использование метода иммуноблота, который представляет собой надежную (и более дешевую) альтернативу ИФА. Так, в лайн-блоте «АНА-профиль 3», основанном на очищенных и рекомбинантных антигенах, производимом фирмой «EUROIMMUN», в одном тесте выявляются антитела к 15 различным внутриклеточным антигенам, охватывающим большинство ядерных мишеней АНА.

Что такое анализ крови на АНФ

Иммунная система человека – уникальный слаженный механизм, способный реагировать на любые внешние внедрения патогенных факторов, тем самым защищая организм от целого ряда заболеваний. Но как известно, из каждого правила есть исключения, и в данном случае они выглядят как реагирование иммунитета на собственные клетки, что получило название аутоиммунные болезни.

При данных патологиях идет выработка антител, атакующих здоровые клетки, поражая или уничтожая их. В результате происходит нарушение функционирования отдельных тканевых структур и даже органов. Такие патологии из-за своей распространенности и вовлеченности в процесс нескольких органов или систем получили название системных заболеваний.

При появлении современных методов лабораторной диагностики, одним из которых является АНФ анализ крови на поиск антинуклеарного фактора, позволяющий выявить антинуклеарные (антиядерные) антитела и определить причину патологии. Данный показатель является одним из маркеров системных заболеваний соединительной ткани (СЗСТ), принятым как «золотой стандарт» данного вида исследований.

Основные понятия, характеризующие СЗСТ

Как уже описывалось выше, патогенез данных патологий берет свое начало со сбоев функционала иммунной системы, и выработке защитных антител к определенным компонентам собственных клеток. Такие клетки за особенность своего происхождения имеют второе название – аутоантитела. В процессе иммунного сбоя они вступают в контакт с белковыми соединениями ядра, нуклеиновыми кислотами и антигенами цитоплазмы, что приводит к появлению симптомов воспалительных заболеваний, таких как:

  • структурные изменения тканей и органов;
  • выраженное необоснованное утомление;
  • болевые ощущения в мышцах и суставах;
  • поражение кожных покровов;
  • снижение веса тела и другие.

Антинуклеарные антитела (АНА) могут образовываться при довольно обширном спектре аутоиммунных патологий, но наибольшая вероятность их появления при системной красной волчанке (СКВ).

АНФ необходимо сдать при признаках длительного воспалительного процесса

Справка! По статистике, более чем у 90% пациентов, страдающих СЗСТ, определяется патологическая выработка подобных антител. На текущий момент изучено около 200 их видов, которые получили обобщенное название – антинуклеарный фактор. В основном они представлены иммуноглобулинами класса G, но иногда встречаются М или А.

Суть анализа крови на антинуклеарный фактор

Прежде чем углубляться в особенности проведения исследования на АНФ, стоит отметить, что методика была изобретена и начала применяться довольно давно – в 60-х годах прошлого века. Но широкое распространение в диагностической практике получила лишь в начале 80-х годов XX века после усовершенствования. В качестве субстрата еще в 1961 году ученый Beck применял клетки лабораторных животных, и только в 1982 году Tan воспользовался перевиваемой клеточной линией человека HEp-2 для поиска АНФ.

Хотя основная цель использования данного теста – это установление диагноза красная волчанка, все же он считается универсальной методикой и для других коллагенозов (СЗСТ). К последним относятся:

  • склеродермия;
  • дерматомиозит;
  • узелковый периартериит;
  • хронический активный гепатит и т. д.

Одной из наиболее удобных, и поэтому чаще всего используемых методик для определения в крови пациентов антинуклеарного фактора, считается непрямая иммунофлюорестенция. Исследование проводится при нанесении сыворотки крови на клетки перевиваемой эпителиоидной линии аденокарциномы гортани человека НЕр-2 (содержащих определенный ряд ядерных антигенов) с применением меченого коньюгата (соединения) с антителами.

Этот выбор сделан неслучайно – клетки НЕр-2 – очень удобный субстрат для изучения биоматериала. Они имеют довольно крупные ядра, и при высадке на лабораторных стеклах растут однослойно. В качестве субстрата можно использовать и другие клеточные линии человека, но удачная морфология и культивирование однозначно делает именно НЕр-2 – незаменимым материалом.

В ходе диагностики при инкубации сыворотки обследуемого с клеточным субстратом, при наличии АНА происходит их соединение с соответствующими нуклеарными антигенами. Места связки АНФ с НЕр-2 определяются при использовании меченого флюоресцеином (красителем) коньюгата. Для выполнения оценки результатов произошедших реакций применяется люминесцентный микроскоп, позволяющий дифференцировать характер и степень получившихся связок.


Люминесцентный микроскоп для лабораторных исследований АНФ

Справка! HEp-2 человека, в отличие от тканевых криосрезов животных, имеют более высокую скорость деления клеток, что дает возможность обнаружить антитела к антигенам, которые экспрессируются лишь при делении. Также в субстрате человека отсутствует клеточный матрикс, снижающий качество визуализации изучаемого свечения.

Какие группы антигенов используются при исследовании?

При расшифровке материалов всегда необходимо брать во внимание, что в спектр АНА входит довольно большая группа аутоантител к нуклеопротеидам, рибонуклеопротеидам, гистонам, ДНК и другим структурным единицам ядра. Из этого следует, что функционал теста направлен на выявление антител к составляющим ядра и цитоплазмы, которые изначально были определены при СКВ.

Позже диагностические возможности исследования были расширены, что обусловлено определением подобных антител при других СЗСТ. В скрининговых методиках для обнаружения суммарных АНА, как правило, применяется определенный набор антигенов, принятых за основные маркеры аутоиммунных ЗСТ.

К ним относятся антитела класса IgG:

АНА практически безвредны для организма – они не способны проникать в живые ткани. Но в отдельных случаях могут соединяться в комплексы антиген-антитело, что в результате приводит к структурным разрушениям тканей. Одним из таких примеров является поражение паренхимы почек при СКВ. Так как при СЗСТ в процесс вовлечено несколько органов, то выявление АНА не является первостепенно важным для диагностики, а считается лишь подтверждением определенной симптоматики.


Возможности анализа АНФ, выраженные в процентном соотношении

Изучение полученных результатов

После проведения всех необходимых процедур – взятия биоматериала и его лабораторной подготовке к исследованию, проводится оценка и интерпретация результатов. Сюда входит определение титра (концентрации) антител и типа свечения. Значимым параметром для диагностики является показатель концентрации свыше 1:160. К примеру, при обострении ревматизма он может превышать отметку 1:640, тогда как в ремиссионном периоде наблюдается понижение до 1:160–1:320.

Тип свечения показывает мишени АНА, что является особо важным клиническим моментом, направляющим последующие действия врача в назначении диагностических мероприятий. По характеру свечения ядер при использовании НЕр-2 определится свыше 20 вариантов ядерного окрашивания, в зависимости от видов присутствующих антител в биоматериале. К основным из них относятся следующие типы свечения.

  • Периферическое. Свечение свидетельствует о наличии анти-ДНК-антител, что подтверждает СКВ. Основным видом антигенов для периферического типа являются гистоновые белки и ДНК.
  • Диффузное (гомогенное). Такое свечение наблюдается при СКВ, сопровождающейся поражением структуры почек и похожих ЗСТ, нефрите, склеродермии, а также лекарственно-индуцированной СКВ. Антигены при данном типе представлены дсДНК, гистонатами и нуклеосомами.
  • Ядрышковое (нуклеарное). Данный тип характерен для системной формы склеродермии, и определяется при присутствии у пациентов антител – PHК полимераза 1, PM/Scl, NOR, U3RNP.
  • Цитоплазматическое. Подобный тип подсвечивания указывает на наличие АНА к тРНК–синтетазам, а именно Jo-1, и наблюдается при полимиозите.
  • Гранулярное. Определяется при синдроме Шегрена, инфекционном мононуклеозе, смешанном ЗСТ (Sharp-синдром, MCTD) и лекарственном волчаночном синдроме. Преимущественно присутствующие антигены для этого типа – SS-A, SS-B, Sm, U1-RNP, и PCNA.
  • Крупногранулярное. Характерно для смешанных ЗСТ и, по мнению многих ученых, связано с наличием антигена RNP.
  • Мелкогранулярное. Определяется присутствие антител, образующихся против рибонуклеиновых белков – АSSP (АЦЦП), SS-A, SS-B и других. Такие антитела характерны для СКВ, также ее специфических кожных формах, ревматоидном артрите, склеродермии, полимиозите, синдроме Шегрена.
  • Центромерное. Данный тип в основном отмечается при склеродермии. Хотя в одном образце крови, особенно у обследуемых с диффузными ЗСТ, в отделенной плазме могут определяться антитела к различным ядерным компонентам.
  • Точечные вкрапления в ядре. Этот тип преимущественно выявляется при болезнях печени аутоиммунного характера. При нем могут сочетаться несколько флюоресцентных типов, к примеру, ядрышковый и мелкогранулярный, что обусловлено антителами к Scl-70.

Справка! Отмечено, что при увеличении разведения плазменного биоматериала параметры свечения могут видоизменяться, так как для многих антител характерна смена активности при разной степени концентрации.

Факторы, способные исказить результаты

На достоверность полученных в ходе исследования данных могут повлиять всего несколько факторов, способных показать и ложноположительный и ложноотрицательный результат. Так, неправдоподобные ответы со сдвигом вверх наблюдаются у пожилых пациентов в возрасте от 60 лет (по статистике в 10–37% случаях) и при приеме медпрепаратов, вызывающих лекарственную волчанку (некоторые антибиотики, контрацептивы, сульфаниламиды, тиазидные диуретики).

Отмечено, что у 5–55% особ женского пола, имеющих грудные имплантаты, повышается уровень концентрации АНА. К ошибочной диагностике со сдвигом вниз может привести употребление глюкокортикоидных препаратов – Преднизолона, Метипреда или Дексаметазона.

АНА (антинуклеарные антитела)

Синонимы: АНА, антинуклеарные антитела, антинуклеарный фактор, АНФ, антиядерные антитела, antinuclear antibodies, ANAs, Fluorescent Antinuclear Antibody, Antinuclear factor, ANF

Научный редактор: М. Меркушева, ПСПбГМУ им. акад. Павлова, лечебное дело.

Аутоиммунные заболевания, когда иммунная система атакует собственные ткани организма, считаются одними из самых опасных. Большинство аутоиммунных патологий относятся к хроническим и могут вызывать серьезные нарушения в работе внутренних органов и систем.

Одним из наиболее распространенных тестов, применяемых в диагностике аутоиммунных состояний, является обследование на антинуклеарные антитела (АНА), который проводится тремя способами:

  • методом иммуноферментного анализа ИФА (определяется общий уровень ANA),
  • методом реакции непрямой иммунофлуоресценции РНИФ (выявляется до 15 разновидностей ANA)
  • методом иммуноблоттинга.

Общие сведения

Антинуклеарные (антиядерные) антитела представляют собой группу аутоантител, которые, вступая в реакцию с ядрами собственных клеток организма, разрушают их. Поэтому анализ на АНА считается достаточно чувствительным маркером в диагностике именно аутоиммунных нарушений, большая часть из которых сопровождается поражением соединительной ткани. Однако некоторые из видов антинуклеарных антител обнаруживаются и при заболеваниях не иммунной этиологии: воспалительных, инфекционных, злокачественных и пр.

Наиболее специфичны антинуклеарные антитела к следующим заболеваниям:

  • системная красная волчанка (СКВ) – заболевание кожи и соединительной ткани;
  • дерматомиозит – поражение кожи, мышц, скелетной ткани и т.д.;
  • узелковый периартериит – воспаление артериальной сосудистой стенки;
  • склеродермия – уплотнение и затвердение соединительной ткани;
  • ревматоидный артрит – поражение соединительной ткани суставов;
  • болезнь Шегрена – поражение ткани с железистыми проявлениями (снижение секрета слезных и слюнных желез).

Антинуклеарные антитела могут обнаруживаться более чем у 1/3 больных хроническим рецидивирующим гепатитом. Также уровень АНА может возрастать в случае:

  • инфекционного мононуклеоза (вирусное заболевание, сопровождается массовым поражением внутренних органов);
  • лейкоза (злокачественное заболевание крови) в острой и хронической форме;
  • гемолитической анемии (малокровие в результате разрушения эритроцитов);
  • болезни Вальденстрема (поражение костного мозга);
  • цирроза печени (хроническое заболевание, связанное с изменением структуры печеночной ткани);
  • малярии;
  • лепры (инфекционное поражение кожи);
  • хронической почечной недостаточности;
  • тромбоцитопении (снижение выработки тромбоцитов);
  • лимфопролиферативных патологий (опухоли лимфатической системы);
  • миастении (патологическая утомляемость мышц);
  • тимомы (опухоль из вилочковой железы).

Одновременно с определением антинуклеарных антител в процессе иммуноферментного анализа оценивается концентрация иммуноглобулинов: IgA, IgM, IgG. Обнаружение этих компонентов в крови может свидетельствовать о высокой вероятности развития ревматических заболеваний и коллагенозов.

В случае, когда связь между концентрацией антител и симптоматикой у больного не обнаруживается, само присутствие антиядерных антител в крови является диагностическим критерием и может повлиять на выбор лечения. Сохранение высокого уровня антинуклеарных антител при продолжительном курсе терапии свидетельствует о неблагоприятном прогнозе заболевания. Снижение значений АНА на фоне проводимого лечения может указывать на ремиссию (чаще) или приближающийся летальный исход (реже).

Также антинуклеарные антитела могут быть обнаружены у здоровых людей до 65 лет (3-5% случаев), после 65 (до 37%).

Исследовать антинуклеарный фактор целесообразно в следующих случаях:

  • Диагностика аутоиммунных и некоторых других системных заболеваний без ярко выраженной симптоматики;
  • Комплексная диагностика системной красной волчанки, ее формы и стадии, а также выбор тактики лечения и составление прогноза;
  • Диагностика лекарственной волчанки;
  • Профилактическое обследование пациентов с диагнозом красная волчанка;
  • Наличие специфических симптомов: продолжительная лихорадка без установленной причины, боли и ломота в суставах, мышцах, кожные высыпания, повышенная утомляемость и т.д.;
  • Наличие симптомов системных заболеваний: поражение кожи или внутренних органов (почки, сердце), артрит, эпилептические припадки и судороги, лихорадка, беспричинное повышение температуры и т.д.;
  • Назначение лекарственной терапии дизопирамидом, гидралазином, пропафеноном, прокаинамидом, ингибиторами АПФ, бета-блокаторами, пропилтиоурацилом, хлорпромазином, литием, карбамазепином, фенитоином, изониазидом, миноциклином, гидрохлортиазидом, статинами, поскольку есть риск развития лекарственной красной волчанки.

Кто дает направление

Помимо врача общей практики, направляют на анализ такие узкие специалисты, как

  • ревматолог,
  • дерматовенеролог,
  • нефролог,
  • педиатр.

Норма для АНА и факторы влияния

В норме антинуклеарные антител в плазме отсутствуют или определяются в небольшом количестве. Результат зависит от способа выполнения теста:

1. Тест делался методом ИФА

  • менее 0,9 пунктов – отрицательно (норма);
  • от 0,9 до 1,1 пунктов – сомнительно (рекомендуется сделать повторный тест через 7-14 дней);
  • более 1,1 пункта – положительно.

2. Для количественного анализа РНИФ нормой считается титр менее 1:160.
3. Иммуноблоттинг – норма «не обнаружено» (общее заключение / напротив каждого вида антител).

Что может повлиять на результат

  • нарушение правил подготовки пациентом или алгоритма венепункции медработником;
  • прием лекарственных препаратов (карбамазепин, метилдопа, пеницилламин, токаинид, нифедилин и др.);
  • наличие у пациента уремии (отравление продуктами белкового обмена) может дать ложноотрицательный результат.

Важно! Интерпретация результатов всегда проводится комплексно. Поставить точный диагноз на основании только одного анализа невозможно.

Антинуклеарные антитела в крови (результат положительный)

Обнаружение антинуклеарных антител может указывать на следующие заболевания:

  • системная красная волчанка;
  • панкреатит (воспаление поджелудочной железы) аутоиммунной природы;
  • сахарный диабет I типа;
  • аутоиммунные поражения щитовидной железы;
  • злокачественные поражения внутренних органов;
  • дерматомиозит;
  • аутоиммунный гепатит;
  • заболевания соединительной ткани;
  • болезнь Шегрена;
  • миастения;
  • склеродермия;
  • ревматоидный артрит;
  • диффузный интерстициальный фиброз (поражение легочной ткани в хронической форме);
  • синдром Рейно (ишемия мелких концевых артерий) и т.д.

Повышение титра АНА при количественном иммуноферментном анализе (РНИФ) говорит о:

  • Системной красной волчанке в активной стадии – титр повышен до 98%;
  • Болезни Крона (гранулематозное поражение пищеварительного тракта) – около 15%;
  • язвенном колите (воспаление слизистой толстой кишки) – от 50 до 80%;
  • склеродермии;
  • болезни Шегрена;
  • Болезни Рейно – до 20%;
  • синдроме Шарпа (смешанное заболевание соединительной ткани);
  • лекарственной волчанке.

Важно! При расшифровке анализа важно понимать, что отрицательный результат не исключает наличия аутоиммунных нарушений у пациентов с характерной симптоматикой. Положительный результат без клинической картины аутоиммунного процесса необходимо интерпретировать с учетом данных других лабораторных анализов.

Биоматериал для проведения ИФА на антинуклеарный фактор – сыворотка венозной крови.

  • Венепункция выполняется в утреннее время и натощак (с момента последнего приема пищи должно пройти минимум 8 часов). Пить чистую негазированную воду можно;
  • Непосредственно перед забором крови (за 2-3 часа) не рекомендуется курить и пользоваться никотинозаменителями (пластырь, спрей, жевательная резинка);
  • Накануне и в день процедуры нельзя употреблять алкогольные и энергетические напитки, волноваться и заниматься тяжелой физической работой;
  • За 15 дней до теста по согласованию с лечащим врачом отменяется прием лекарственных препаратов (антибиотики, противовирусные, гормоны и др.);
  • Для получения достоверного результата анализ желательно повторить через 2 недели.

Ответ ИФА можно ожидать в течение 1 суток после венепункции, а в экстренных ситуациях, когда обследование проводится по «cito» – около 3 часов.

Антинуклеарный фактор (АНФ) и антитела (АНА): понятие, исследование и показания к нему, причины обнаружения

© З. Нелли Владимировна, врач лабораторной диагностики, квалификация по иммунодиагностике, специально для СосудИнфо.ру (об авторах)

Открытие антинуклеарных антител (АНА), вошедшее в число главных достижений иммунологической науки, дало клинической лабораторной диагностике новые возможности для выявления ряда патологических состояний. Анализ крови, определяющий антинуклеарный фактор (АНФ), входит в группу наиболее востребованных серологических исследований и находится в числе «золотых стандартов» диагностики аутоиммунных процессов, которые приводят к развитию системной патологии соединительной ткани. Данный тест при наличии подозрительных симптомов позволяет регистрировать изменения соединительной ткани на самой ранней стадии патологического (аутоиммунного) процесса.

Антинуклерные антитела

Системные заболевания соединительной ткани (СЗСТ) возникают на почве агрессии иммунной системы против собственных антигенов (аутоантигенов), что сопровождается выработкой аутоантител.

Аутоантитела, направленные против растворимых компонентов клеточного ядра (рибонуклеопротеинов), составляют целое семейство (более 200 разновидностей) антинуклеарных (антиядерных) антител (АНА). Семейство это носит название – антинуклеарный фактор или АНФ, хотя, следует заметить, с названиями иной раз возникает путаница, поскольку все же под термином «антинуклеарный фактор» подразумевают исследование сыворотки, обнаруживающее антинуклеарные антитела с участием метода непрямой иммунофлюоресценции (см. ниже).

И все же в настоящее время чаще принято говорить об антинуклерных антителах и методах их обнаружения. В норме АНА в организме не образуются, поэтому и нормы, как таковой, не существует.

Антинуклеарные антитела легко вступают во взаимодействие со всеми составляющими структурами клетки, запуская воспалительные реакции в органах и тканях, что отражается на их функциональных способностях. Естественно, у всех аутоиммунных заболеваний можно найти общие симптомы:

  • Суставные и мышечные боли;
  • Слабость;
  • Снижение массы тела;
  • Поражение кожных покровов.

Однако при этом каждая аутоиммунная болезнь наделена и своими специфическими симптомами.

Чаще всего антинуклеарный фактор назначается и выявляется в высоких титрах при системной красной волчанке (СКВ), присутствуя в сыворотке крови почти у всех пациентов (более 90%). Однако сам позитивный ответ теста не доказывает формирование патологии, у людей здоровых людей, превосходно себя чувствующих, титр тоже может быть несколько повышен. В данном случае специалист, который проводит исследование, определяет мишени АНА, чтобы впоследствии разработать правильную тактику в плане обследования пациента.

Таблица: встречаемость антинуклеарных антител при различных заболеваниях

Расшифровку исследования проводит специалист в области иммунологии (реже – ревматологии), который хорошо ориентируется в механизме образования антител и может провести дифференциальную диагностику, если в этом возникает необходимость. Для данного анализа самодеятельность абсолютно неуместна.

Причина назначения анализа и факторы, влияющие на результат

Как выше сказано, поиск АНФ в первую очередь находится в зоне внимания иммунолога и ревматолога, правда, врачи других специальностей тоже иной раз проявляют интерес к данному исследованию, однако он уже не столь велик, поскольку назначается тест, прежде всего, в случаях:

  1. Появления симптомов, указывающих на развитие аутоиммунного процесса, затрагивающего соединительную ткань (лихорадка в течение длительного периода, не отступающие суставные боли, снижение работоспособности, похудение, изменения со стороны кожи);
  2. Необъяснимого повышения показателей общего и биохимического анализа крови (увеличения СОЭ, концентрации СРБ – C-реактивного белка, и ЦИК – циркулирующих иммунных комплексов).

Врачи, занятые в области иммунологии и ревматологии используют исследование для:

  • Диагностики системной патологии соединительной ткани;
  • Дифдиагностики ряда ревматологических заболеваний, симптомы которых, как правило, схожи, но лечение – отличается;
  • Оценки эффективности проводимого лечения системных заболеваний соединительной ткани;
  • Мониторинга течения аутоиммунных процессов.

В иных случаях могут «выскакивать» ложноположительные или ложноотрицательные результаты.

Ложный плюс можно ожидать у пациентов:

  1. После 60-летнего возраста (до 35% случаев);
  2. Принимающих фармацевтические средства, которые при длительном применении сами по себе способны дать старт развитию системной красной волчанки. К ним относятся: некоторые антибиотики, сульфаниламиды, мочегонные группы тиазидов, гормональные противозачаточные средства, соли золота и лития, отдельные гипотензивные и многие другие препараты.

Наоборот, ложный минус можно получить при использовании таких гормонов, как дексаметазон, преднизолон, метипред (метилпреднизолон).

Следует заметить, что:

  • Разновидность болезни (системной красной волчанки) может быть АНФ-негативной (5%), поэтому при наличии симптомов данной патологии и отрицательном АНФ требуется дополнительное исследование – выявление АТ к SS-антигенам;
  • Нельзя воспринимать положительный результат, как неопровержимое доказательство заболевания – в сыворотке 5 – 10% здоровых людей описываемый показатель может быть повышен;
  • Полученные в ходе исследования результаты рекомендуется сопоставлять с данными клинической симптоматики и других лабораторных тестов – только комплексный подход способен установить точный диагноз;
  • В случае позитивного результата, полученного любым методом, необходимо подтверждение специфичности антинуклеарных антител иммуноблоттингом.

Хотя не особо мнительные люди, случайно пройдя подобное тестирование, могут не придавать своим результатам большого значения, продолжая жить полноценной активной жизнью. Конечно, если не жалуются на свое здоровье. А вот мнительные… Они – наоборот, могут даже и симптомы у себя найти, поэтому подобный анализ крови должен осуществляться только по назначению иммунолога, а не по собственной инициативе пациента.

Когда АНФ повышен

Преимущественно, в уточнении АНФ проявляет потребность подозрение на системную красную волчанку. Между тем, он повышен и при развитии других аутоиммунных состояний, кстати, иногда очень напоминающих СКВ, например:

  1. Наиболее распространенной разновидности красной волчанки – дискоидной форме, главными симптомами которой выступает поражение кожных покровов и слизистых оболочек. Эту форму нередко связывают с воздействием солнечных лучей, низких температур, инфекции, хотя причина ее остается невыясненной;
  2. Лекарственной волчанке, возникающей на фоне применения отдельных групп фармацевтических препаратов (антиаритмических, гипотензивных, противотуберкулезных, антибактериальных, противосудорожных и др.);
  3. Системной склеродермии, возникающей по неизвестным причинам, сопровождающейся разрастанием соединительной ткани (фиброз) с образованием рубцов, которые нарушают функционирование многих органов, а также поражением сосудистого русла на различных участках;
  4. Синдроме Шегрена, который, помимо того, что относится к СЗСТ, в числе симптомов имеет патологические изменения желез внешней секреции (преимущественно – слезных, слюнных);
  5. Синдроме Рейно, характеризующемся неадекватной реакцией (спазмом) сосудов в ответ на холод либо психоэмоциональное напряжение;
  6. Синдроме Шарпа, называемом смешанным заболеванием соединительной ткани;
  7. Ревматоидном артрите, что, в общем-то, понятно, ведь это тоже системная аутоиммунная патология;
  8. Патологических изменениях соединительной ткани диффузного характера – ДЗСТ (полимиозит);
  9. Туберкулезном процессе;
  10. Миастении с тяжелым течением;
  11. Васкулитах в стадии некротизирующего воспаления;
  12. Инфекционном мононуклеозе;
  13. Инфекционном эндокардите;
  14. Поражениях печени: хроническом гепатите аутоиммунного происхождения, биллиарном циррозе (первичном);
  15. Лейкозе, лимфоме и злокачественных опухолях других локализаций;
  16. Интерстициальных болезнях легких – ИБЛ (межуточном легочном фиброзе, рентгенологически и морфологически – «сотовое легкое»);
  17. Необратимых поражениях легких, связанных с профессиональной деятельностью (пневмокониоз).

Но лишь полное, всеобъемлющее обследование пациента может установить малоутешительный диагноз, с которым придется бороться всю дальнейшую жизнь. Или опровергнуть его.

АНФ, симптоматика и прочие лабораторные тесты

Позитивный антинуклеарный фактор обычно предполагает проведение ряда других лабораторных исследований. Конечно, не обходится без общего анализа крови (ОАК), в котором основное внимание направлено на изменение скорости оседания эритроцитов (СОЭ) – она находится под постоянным контролем (анализ пациенты сдают чаще, нежели сам ОАК). Периодически контролируется РФ (ревматоидный фактор), СРБ (С-реактивный белок – в количественном выражении), АСЛО (антистрептолизин О), антитела к кардиолипиновому антигену (IgG и IgM). Кроме этого, пациенту могут назначаться и более сложные тесты:

Очевидно, как антинуклеарный фактор, так и все АНА могут появляться при многих и, следует заметить, довольно не простых патологических состояниях, поэтому и назначаются эти анализы крови только врачом, способным расшифровать и интерпретировать полученный результат. Само исследование обычно не требует особой подготовки (как любой биохимический тест), кроме того, что пациент должен предупредить, какие лекарственные средства он принимает, чтобы врач обозначил время, когда можно сдавать анализ. И еще: курящим пациентам за полчаса до отбора проб настоятельно рекомендуется расстаться со своей привычкой.

Видео: специалист об антиядерных антителах – основное

Антинуклеарный фактор на HEp-2 клетках, IgG

Метод исследования с использованием человеческих эпителиальных клеток HEp-2, который позволяет обнаружить антинуклеарные антитела – один из маркеров системных заболеваний соединительной ткани.

Синонимы русские

АНФ, антиядерные антитела, антинуклеарные антитела (АНА).

Синонимы английские

Antinuclear Antibodies (ANA), Hep-2 Substrate, ANA-Hep2, Fluorescent AntiNuclear Antibody detection (FANA).

Метод исследования

Непрямая реакция иммунофлюоресценции.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Определение антинуклеарного фактора (АНФ) является «золотым стандартом» выявления антинуклеарных антител (АНА) и диагностики аутоиммунных заболеваний.

Патогенез системных заболеваний соединительной ткани (СЗСТ) тесно связан с нарушениями в иммунной системе и повышенной выработкой антител к структурам собственных клеток. Аутоантитела к компонентам ядра клеток – антинуклеарные антитела – взаимодействуют с нуклеиновыми кислотами и белками ядра, антигенами цитоплазмы, что проявляется воспалительными изменениями в тканях и органах, болями в суставах и мышцах, выраженным утомлением, потерей веса, кожными изменениями. АНА обнаруживаются при многих аутоиммунных заболеваниях, но наиболее характерны для системной красной волчанки (СКВ). АНА встречаются более чем у 90 % больных системными заболеваниями соединительной ткани, в настоящее время описано около 200 разновидностей, которые объединены единым названием – антинуклеарный фактор.

При определении АНФ методом непрямой флюоресценции чаще используется перевиваемая линия эпителиальных клеток аденокарциномы гортани человека НЕр-2. Клетки НЕр-2 являются очень удобным субстратом для лабораторного исследования, так как обладают крупными ядрами и на стеклах растут в один слой. АНА выявляются при связывании с внутриклеточными антигенами клеток НЕр-2.

При исследовании эпителиальные клетки НЕр-2 выращивают на стеклах, фиксируют и инкубируют с разведенной сывороткой крови пациента. После удаления избытка сыворотки клетки инкубируют с меченными флюоресцеином антителами, затем снова промывают и исследуют с помощью флюоресцентного микроскопа. При этом определяется титр антител и тип свечения. Диагностически значимым считается титр более 1:160. При обострении ревматических заболеваний он превышает 1:640, а в период ремиссии снижается до 1:160-1:320. Чем больше антител, тем выше титр. По типу свечения можно установить мишени антинуклеарных антител, что имеет важное клиническое значение и определяет тактику дальнейшего обследования пациента. Основными являются периферический, гранулярный (мелко-/крупно-), ядрышковый, центромерный и цитоплазматический типы окрашивания ядра. Каждому типу свечения присущи очень характерные признаки, которые позволяют отличить один вариант от другого.

Гомогенное (диффузное) окрашивание связано с наличием антител к двуспиральной ДНК, гистонам и характерно для СКВ и лекарственной волчанки.

Периферическое свечение обусловлено периферическим распределением хроматина в ядре, связано с антителами к ДНК и специфично для СКВ. Данный тип свечения важно дифференцировать от окрашивания ядерной мембраны, которое происходит при аутоиммунных заболеваниях печени.

Гранулярное (крапчатое, сетчатое) окрашивание встречается наиболее часто и является наименее специфичным, выявляется при многих аутоиммунных заболеваниях. Аутоантигенами в данном случае выступают нуклеопротеиновые комплексы в ядре (Sm, U1-RNP, SS-A, SS-B антигены и PCNA).

Очень высокие титры АНФ с крупногранулярным типом свечения часто указывают на смешанное заболевание соединительной ткани.

Нуклеарное (ядрышковое) окрашивание обусловлено антителообразованием к компонентам ядрышка (PHК-полимераза-1, NOR, U3RNP, PM/Scl), выявляется при склеродермии, болезни Шегрена. АНА иногда повышаются при эндокринных заболеваниях (сахарном диабете 1-го типа, тиреоидите, тиреотоксикозе, полиэндокринном синдроме), кожных заболеваниях (псориазе, пузырчатке), при беременности, после трансплантации органов и тканей, у больных на гемодиализе.

Центромерное свечение появляется при наличии антител к центромерам хромосом и характерно для формы склеродермии – CREST-синдрома.

Цитоплазматический тип свечения связан с антителами к тРНК-синтетазе, в частности к Jo-1, что характерно для дерматомиозита и полимиозита. Данный тип окрашивания также определяется при наличии антител к другим компонентам цитоплазмы при аутоиммунном гепатите, первичном билиарном циррозе.

Одновременное выявление различных типов свечения указывает на присутствие разных видов антител.

У здоровых людей может быть обнаружено мелкогранулярное свечение при низких, умеренных или высоких титрах АНА, но в норме крупнозернистые или гомогенные типы свечения не должны определяться.

В зависимости от результатов оценки типа свечения разрабатывается дальнейшая тактика лечения пациента и назначаются дополнительные исследования, уточняющие спектр АНА.

Для чего используется исследование?

  • Для диагностики системных заболеваний соединительной ткани.
  • Для дифференциальной диагностики ревматических болезней.
  • Чтобы оценить эффективность терапии аутоиммунных заболеваний.
  • Для наблюдения за течением системных заболеваний соединительной ткани.

Когда назначается исследование?

  • При симптомах аутоиммунного заболевания (длительное повышение температуры, боли в суставах, усталость, потеря массы тела, изменение кожных покровов).
  • При выявлении изменений, характерных для системных заболеваний соединительной ткани (повышение СОЭ, уровня С-реактивного белка, циркулирующих иммунных комплексов).

Что означают результаты?

Референсные значения

Результат: отрицательный.

Титр:

Причины повышения титра АНФ на HEp-2 клетках:

  • cистемная красная волчанка (в 95 % случаев),
  • дерматомиозит/полимиозит,
  • системная склеродермия (в 60-90 % случаев),
  • синдром Шегрена (в 40-70 % случаев)
  • смешанное заболевание соединительной ткани (синдром Шарпа),
  • синдром Рейно,
  • дискоидная волчанка,
  • лекарственная волчанка,
  • ревматоидный артрит,
  • некротизирующий васкулит,
  • инфекционный мононуклеоз,
  • лейкемия,
  • злокачественные новообразования (преимущественно лимфома),
  • тяжелая миастения,
  • инфекционный эндокардит,
  • хронический аутоиммунный гепатит,
  • первичный билиарный цирроз печени,
  • туберкулез,
  • пневмокониоз,
  • интерстициальный фиброз легких.

Типы свечения

Тип свечения

Для чего он характерен

Гомогенный

Для СКВ, лекарственной волчанки, системной склеродермии, хронического активного гепатита

Периферический

Для СКВ

Гранулярный

Для СКВ, синдрома Шегрена, смешанной болезни соединительной ткани, ревматоидного артрита

Ядрышковый

Для полимиозита/дерматомиозита, склеродермии, синдрома Шегрена, СКВ

Центромерный

Для CREST-синдрома (кальциноза кожи, синдрома Рейно, эзофагеальной дисфункции, склеродактилии, телеангиоэктазии)

Цитоплазматический

Для дерматомиозита/полимиозита, аутоиммунного заболевания печени, первичного билиарного цирроза

Что может влиять на результат?

  • Ложноположительному результату способствует:
    • возраст старше 60-65 лет (в 10-37 % случаев);
    • применение лекарственных препаратов, которые могут привести к лекарственной волчанке (ацетазоламид, карбидопа, хлоротиазид, хлорпромазин, клофибрат, этосуксимид, соли золота, гризеофульвин, гидралазин, изониазид, соли лития, метилдопа, пероральные контрацептивы, пенициллин, фенилбутазон, фенитоин, примидон, прокаинамид, пропилурацил, хинидин, резерпин, стрептомицин, сульфаниламид, тетрациклин, тиазидные диуретики).
  • Прием глюкокортикостероидов (преднизолон, дексаметазон, метипред) иногда приводит к ложноотрицательному результату.



Важные замечания

  • В 5 % случаев СКВ возможен отрицательный результат данного анализа (АНФ-отрицательная СКВ). В таких ситуациях для уточнения диагноза необходимо определить антитела к SS-антигенам (Ro).
  • Положительный результат теста не является абсолютным доказательством наличия аутоиммунного заболевания. У здоровых людей в 3-13 % случаев титр АНФ повышен и достигает 1:320.
  • Результаты теста необходимо оценивать в комплексе с клиническими данными и другими лабораторными показателями.
  • При положительном результате исследования рекомендовано определить специфичность АНА иммуноблотом.

Также рекомендуется

  • Антитела к двухцепочечной ДНК (анти-dsDNA), скрининг
  • Антитела к ядерным антигенам (ANA), скрининг
  • Антитела к экстрагируемому ядерному антигену (ENA-скрин)
  • Антитела к кардиолипину, IgG и IgM
  • Антинуклеарные антитела, IgG (анти-Sm, RNP/Sm, SS-A, SS-B, Scl-70, PM-Scl, PCNA, dsDNA, CENT-B, Jo-1, к гистонам, к нуклеосомам, Ribo P, AMA-M2), иммуноблот
  • Общий анализ крови (без лейкоцитарной формулы и СОЭ)
  • Скорость оседания эритроцитов (СОЭ)
  • Антистрептолизин О
  • С-реактивный белок, количественно
  • Ревматоидный фактор
  • Циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК)
  • С3 компонент комплемента
  • С4 компонент комплемента

Кто назначает исследование?

Ревматолог, иммунолог.

Литература

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *